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Précautions d’emploi des Tubes à centrifuger de l’ultrafiltration

Oct 30, 2017

(1) sélectionnez le tube d’ultrafiltration approprié. Le poids moléculaire ne faut pas plus de 1/3 du poids moléculaire de la protéine cible, par exemple, le poids moléculaire de la protéine cible est 35kDa et le tube de l’ultrafiltration avec poids moléculaire peut être sélectionné par 10kDa. Si le poids moléculaire de la protéine cible est sur 10kD, il peut être utilisé pour intercepter le poids moléculaire du tube d’ultrafiltration 3kD. Lire attentivement les instructions et faites attention aux différents types de tolérance membrane ultrafiltration à divers produits chimiques.

(2) nouvellement acheté l’ultrafiltration est sec, avant de l’utiliser pour ajouter de l’eau ultra pure, le volume de la membrane entière, le bain de glace ou le réfrigérateur préréfrigérant pendant quelques minutes. Puis versez l’eau, Tube à centrifuger vous pouvez ajouter le liquide de protéine, ajouter le nombre, ne dépassant ne pas la ligne blanche sur le dessus du tube. L’opération devrait être de lumière, avant d’ajouter le liquide de protéine, le tube de l’UF doit être inséré sur la glace à préréfrigérant.

(3) solde. La qualité et le centre de gravité doivent être équilibrés. Notez que la vitesse et l’accélération ne doivent pas être trop rapide, ou d’endommager la membrane d’ultrafiltration directement. Centrifuger l’ultrafiltration centrifuge Tube commencer (centrifugeuse préréfrigérant à 4 degrés). La vitesse de rotation tr/min de centrifugeuses différents est changée en G, ce qui est différent. L’accélération de la centrifugeuse est réglée sur le train le plus bas pour réduire la pression sur le film. Notez, doit attendre la centrifugeuse pour atteindre la vitesse de l’objectif, la place peut quitter la centrifugeuse, sinon la centrifugeuse problème, ne peut pas traiter la première fois. La direction de la membrane et la charnière est ajustée selon la spécification (la condition de la centrifugeuse rotative angulaire, c’est que le film est perpendiculaire à l’arbre). Dans l’utilisation réelle, la vitesse générale de l’ouverture que les instructions dans la partie inférieure, il peut prolonger sa durée de vie du tube à centrifuger.

(4) lorsque la concentration au reste à 1ml, prenez 50ul tampon, ajouter 10ul usure de flux, voir si il n’y a aucun changement en bleu, afin de déterminer si le tube d’ultrafiltration est manque de protéines. Si le tube de fuite, versez la couche supérieure et le débit à travers le nouveau tube et commencer à l’ultrafiltration. Pour déterminer avec précision si la fuite tube, 5MGML BSA centrifuger 10min et ensuite prendre le flux d’usure, de colle de protéine en cours d’exécution ou de test grossier de Bradford, continuer à ajouter le reste de la concentration de protéine liquide (sur l’exploitation de la glace, pour empêcher la chaleur de la protéine) jusqu'à ce que tout le liquide d’enrichissement est ajouté. Au cours du processus centrifuge, faites attention à la présence de dépôts de protéines, aboutissant à l’obstruction. En cas de précipitations, pour déterminer que la cause précise de précipitations est la protéine concentration est trop élevée ou tampon n’est pas appropriée ; Le premier peut être résolu par ultrafiltration avec plusieurs tubes d’ultrafiltration, Tube à centrifuger la méthode de réduction de la concentration, ce dernier est de changer la solution tampon différents jusqu'à ce que la protéine ne produit pas précipité.

(5) les étapes précédentes pour concentrer les protéines, si vous souhaitez modifier la mémoire tampon, quand la solution de protéines totales condensés à 1ml ou alors, ajoutent doucement la nouvelle mémoire tampon (après 0.22um l’ultrafiltration ultrafiltration membranaire) et puis condensés à 1 ml ou alors, trois fois de suite, la concentration finale de concentré volume final dépend de la concentration de protéine nécessaire, généralement pas plus de 500ul, il est aussi une affaire de concentration à 200ul. Selon la concentration volumique de fois d’au moins 10 fois par heure, Tube à centrifuger trois fois jusqu'à 1000 fois fois, fondamentalement peut atteindre l’objectif de la mémoire tampon.